CELL DEATH UNDER CONDITIONS OF HAPTIC CONTAMINATION OF BIOLOGICAL MEDIA BY STABLE STRONTIUM

Full Text

Введение Апоптоз является распространенной формой клеточной гибели, имеющей решающее значение для нормального развития и функционирования многоклеточных организмов [9]. Поскольку у здорового взрослого человека для поддержания постоянного числа клеток каждый день образуется приблизительно 1011 -1012 клеток, то быстрая пролиферация должна компенсироваться апоптозом. Нарушения этого баланса в любом направлении имеет для организма негативные последствия, вызванные развитием патологических процессов. Аномально высокий уровень гибели клеток обнаруживается при СПИД и сердечно-сосудистых заболеваниях, нейродегенера-тивных заболеваниях, включая болезни Альцгеймера и Паркинсона, между тем ингибирование апоптоза выявляется при онкологических заболеваниях [14]. Воздействия различных внешних и внутренних факторов способствуют дисрегуляции апоптоза. Показано, что неудовлетворительное качество среды обитания приводит к контаминации биосред (крови) химическими веществами, обуславливающей нарушения клеточной гибели. В частности, присутствующие в питьевой воде щелочно-земельные металлы (например, стабильный стронций, Sr2+), являющиеся гапте-нами, формируют особенности микрокомпонентного состава биосред, вследствие чего трансформируются апоптотические сигналы, изменяющие генетическую программу клетки [3, 4]. Нарушения клеточной гибели в условиях конта-минантной нагрузки биосред, обусловленной воздействием химических факторов среды обитания, могут проявляться активацией апоптоза или, наоборот, ингибированием реализации данного процесса. При этом наиболее чувствительным к негативным воздействиям химического фактора является детский организм. Формирование иммунной системы организма происходит на протяжении всего периода детства и многими авторами рассматривается в качестве основной мишени токсического воздействия загрязняющих веществ. Вероятность нарушения клеточной гибели, ассоциированная с избыточной контаминацией биосред гаптенами, обусловили актуальность данного исследования. Цель работы - исследование показателей, характеризующих клеточную гибель, у детей с избыточной гаптенной контаминацией биосред природным стабильным стронцием. Методы При планировании исследования выполнен расчет объема выборки, достаточной для проверки статистической значимости различий с учетом альфа-ошибки (а = 0,05) и статистической мощности (80 %). Настоящее исследование выполнено с соблюдением этических требований Хельсинкской декларации ВМА 2000 г. и протокола Конвенции Совета Европы о правах человека и биомедицине 1999 г. Проведенные исследования одобрены этическим комитетом ФБУН «ФНЦ МПТ УРЗН» Роспотребнадзора. Выполнено одномоментное поперечное исследование. Проведено углубленное обследование 101 ребенка дошкольного возраста, мальчиков - 40 (40 %), девочек - 61 (60 %), проживающих на территориях с различным содержанием стабильного стронция в питьевой воде (Sr2+). Группу сравнения составил 51 ребенок, потребляющие питьевую воду удовлетворительного качества по содержанию стронция, группу наблюдения - 50 детей, потребляющие питьевую воду из подземных источников питьевого водоснабжения с избыточным содержанием природного стабильного стронция. Критерии включения в исследование: дети от 4 до 8 лет со второй группой здоровья, принадлежность к европеоидной расе, отсутствие приема иммунокорректоров и глюкокортикостероидов последние шесть месяцев, отсутствие в анамнезе иммунозависимой патологии, врожденной патологии, согласие родителей (опекунов) на участие в исследовании. Критерии исключения: наличие заболеваний в стадии декомпенсации (органические и инфекционные поражения центральной нервной системы, заболевания сердечно-сосудистой системы, бронхолегочной и мочеполовой систем, заболевания желудочно-кишечного тракта), участие обследуемых детей в другом исследовании. Все родители (опекуны) подписали информированное согласие на участие в исследовании и использование персональных данных. По социально-бытовым критериям дети группы наблюдения и группы сравнения были сопоставимы и соответствовали среднему уровню материальной обеспеченности, жилищные условия отвечали гигиеническим требованиям. Анализ содержания металлов в биосредах детей (кровь) выполнен с помощью метода масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой на приборе Agilent 7500сх (Agilent Technologres Ihc., USA). Определение мембранных и внутриклеточных маркеров клеточной гибели выполняли с помощью проточного цитометра FACSCalibur фирмы Becton Dickinson («BD», USA). Определение уровня экспрессии мембранных CD-рецепторов CD95+ (FAS), CD25+ на лимфоцитах проводили методом мембранной иммунофлюоресценции с использованием панели меченых моноклональных антител (МКАТ) к мембранным CD-рецепторам («BD», USA). Определение внутриклеточного маркёра апоптоза - р53-протеина - проводилось с помощью МКАТ против белка р53, конъюгированных с PE (Phycoerythrin) Becman Coulter («BC», USA) согласно протоколу фирмы-производителя. Уровень апоптоза лимфоцитов определяли с помощью окрашивания аннексином V-FITC (Annexin V-FITC) и пропидиум йодидом (PI (Propidium Iodide)) («BD», USA) Annexin V-FITC+PI- - ранний апоптоз, Annexin V-FITC+PI+ - поздний апоптоз и/или некроз. Забор материала для полимеразной цепной реакции (ПЦР) проводился методом взятия мазков со слизистой оболочки ротоглотки. Затем выделяли ДНК с помощью сорбентного метода, в основе которого лежит разрушение клеток с дальнейшей сорбцией 22 Ekologiya cheloveka (Human Ecology) 2021, 10, pp. 21-28 Original Articles нуклеиновых кислот на сорбент. Для исследования полиморфных вариантов в изучаемых генах использовали методику ПЦР, в основе которой лежит реакция амплификации и детекция продуктов этой реакции в режиме реального времени (мультиплексная ПЦР). В качестве праймеров использовали участки ДНК генов: CPOX rs1131857; CYP1A1 Ile462Val; MMP9 Gln279Arg; ТР53 rs178841594; MTHFR rsl80ll3l. Для определения генотипа человека использовали метод аллельной дискриминации, когда различия между гетерозиготами, гомозиготами дикого и минорного вариантов устанавливали по различиям в протекании реакций амплификации соответствующих праймеров. Экспериментальные модели in vitro. Для изучения воздействия стронция на клеточную гибель использовали суспензию лимфоцитов, полученную от экспонированных детей. В экспериментах с анализируемым гаптеном жизнеспособность клеток оценивали после инкубации в термостате при 37 °С, время инкубации подбирали опытным путем (1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов). Жизнеспособность клеток рассчитывается как количество жизнеспособных клеток, поделенное на общее число клеток в камере Горяева. Клетки, окрашенные трипановым синим, считаются нежизнеспособными. Этот краситель не проникает через мембраны живых клеток, но при их повреждении способен окрашивать клеточное ядро. Жизнеспособность клеток должна быть не менее 95 % для здоровых культур. Для изучения влияния Sr2+ на реализацию апоптоза опытные пробы инкубировали со стронцием в концентрации 0,07 мг/дм3 (соответствующей референтной концентрации для крови) в течение 4 часов при 37 °С. В качестве контроля использована суспензия клеток без добавления стронция, которые инкубировались при таких же условиях. Статобработка данных по генотипированию проводилась с использованием унифицированной программы «Ген Эксперт», служащей для расчета статистических параметров для исследований «случай - контроль», использующих SNP. Проверка распределения количественных данных проводилась с помощью статистического критерия Колмогорова - Смирнова. Для описания данных, имеющих нормальное распределение, использовали среднее арифметическое значение (М), стандартное отклонение (SD) и 95 % доверительного интервала для среднего (95 % ДИ). Данные с распределением, отличающимся от нормального, описаны с помощью медианы (Ме), 25-го и 75-го процентилей (Р25; Р75) и 95 % доверительного интервала для медианы (95 % ДИ). Для проверки нулевых гипотез о равенстве средних значений между двумя независимыми группами применялся критерий Манна - Уитни. Сравнение выборочных данных с референтными уровнями выполнено с использованием одновыборочного критерия Вилкоксона. Уровень значимости, на котором проводилась проверка нулевых гипотез, принимался равным 0,05. Статистический анализ данных осуществляли с помощью программы Statistica 6.0 (StatSoft, США). Результаты В биосредах детей, потребляющих питьевую воду с повышенным содержанием стронция, данный щелочно-земельный металл идентифицирован в диапазоне от 0,040 до 0,091 мг/дм3 (табл. 1). Максимальное значение Sr2+ в крови детей, проживающих на территории стронциевой геохимической провинции, статистически значимо (р = 0,020) в 1,2 раза превышает верхнюю границу диапазона референтного интервала стронция в крови. Доля проб с избыточным содержанием стронция в крови относительно референтных значений в крови детей группы наблюдения составила 50 %. Установлено, что у детей, экспонированных стронцием, в биологических средах статистически значимо (р = 0,020) в 2,2 раза повышено среднегрупповое содержание стронция по сравнению со значениями, полученными у неэкспонированных детей. У детей группы сравнения стронций в крови идентифицирован в диапазоне от 0,002 до 0,040 мг/дм3 и находится пределах референтного интервала. Таблица 1 Сравнительная оценка содержания стабильного стронция в крови детей Показатель Группа сравнения (n = 51) Группа наблюдения (n = 50) M 0,027* 0,058 SD 0,0047 0,0114 95 % для M 0,017 - 0,036 0,036-0,080 Min - Max 0,002-0,040 0,040 - 0,091** Примечания:* - p = 0,020; ** - р = 0,020; референтные значения = 0,010-0,077 [13]. У детей при гаптенной контаминации биосред статистически значимо (р < 0,001) в среднем в 1,8 раза повышена экспрессия (долевое содержание и абсолютное число) маркёра ранней активации CD25+ на Т-клетках относительно контрольного диапазона значений. Обнаружено, что у детей группы наблюдения статистически значимо (р < 0,001) в 3,8 раза снижена экспрессия белка р53 по сравнению с результатами, полученными у детей группы сравнения (табл. 2). Изучение мембранных маркёров апоптоза выявило у экспонированных детей статистически значимое (р < 0,001) в 1,5 раза повышение долевого содержания Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD95+-рецептор, относительно контрольного диапазона. Оценка результатов иммунологического обследования показала, что у детей с повышенным содержанием в крови стабильного стронция, статистически значимо (р < 0,001) в 2,2 раза снижено количество Annexin V-FITC+PI-- клеток по сравнению с результатами, полученными у детей, в биосредах которых стронций идентифицирован в пределах референтных значений. Обнаружено, что у детей группы наблюдения статистически значимо (р < 0,001) в 1,5 раза увеличено содержание Annexin V-FITC+PI+- клеток по отношению к значениям, полученным у детей группы сравнения. 23 Оригинальные статьи Экология человека 2021, № 10, с. 21-28 Таблица 2 Изменение показателей клеточной гибели в зависимости от уровня контаминации крови стронцием у обследуемых детей Показатель Группа сравнения (п = 51) Группа наблюдения (п = 50) р Ме (Р25; Р75) 95 % ДИ Ме (Р25; Р75) 95 % ДИ CD25+, % 6,00 (5,00; 7,00) 5,68 - 6,89 12,00 (6,50; 19,50) 10,31 - 17,35 <0,001 CD25+, 109/дм3 0,15 (0,12; 0,18) 0,13 - 0,17 0,25 (0,20; 0,48) 0,24-0,44 <0,001 CD95+, % 26,00 (21,00; 33,00) 25,03-29,22 17,50 (13,50; 23,50) 15,48-22,92 <0,001 CD95+, 109/дм3 0,63 (0,52; 0,76) 0,60 - 0,73 0,43 (0,33; 0,55) 0,37-0,60 <0,001 р53, % 2,03 (1,57; 3,31) 1,75-3,67 0,53 (0,28; 0,88) 0,22-0,98 <0,001 Annexin V-FITC+PI-, % 1,49 (1,22; 1,78) 1,34-1,78 0,67 (0,47; 0,97) 0,55-0,88 <0,001 Annexin V-FITC+PI+, % 6,97 (5,55; 9,82) 6,64 - 8,86 10,57 (8,68; 14,72) 9,53-16,10 <0,001 Установлены негативные ассоциации полиморфизма гена ММР9 Gln279Arg, характеризующиеся статистически значимой избыточной распространенностью гетерозиготного варианта в 2,5 раза, что указывает на наличие негативной генетической вариабельности с предрасположенностью к онкологическим и аутоиммунным заболеваниям (табл. 3). Статистический анализ SNP-различий гена ММР9 Gln279Arg между группами наблюдения и сравнения позволил установить соответствие показателей «случаи» и «контроли» равновесию Харди - Вайнберга, которое характеризуется отсутствием значимых различий между имеющейся и ожидаемой частотами генотипов генов, что в дальнейшем позволяет оценить вклад Таблица 3 Особенности генетического полиморфизма у детей, потребляющих воду с повышенным содержанием стронция Ген Генотип Группа сравнения (n = 51) Группа наблюдения (n = 50) Абс. % Абс. % MTHFR rs1801131 GG 18 35 21 41 GA 27 53 20 41 AA 6 12 9 18 G 62 62 62 62 A 40 38 38 38 CPOX rs1131857 AA 37 74 36 71 CA 10 19 13 26 CC 4 7 1 3 A 86 84 84 84 C 16 16 16 16 CYP1A1 Ile462Val GG 42 84 45 89 GA 8 14 5 11 AA 1 2 0 0 G 92 91 94 94 A 10 9 6 6 MMP9 Gln279Arg AA 28 56 15 30 GA 16 32 33 66 GG 7 12 2 4 A 72 72 64 64 G 30 28 36 36 TP53 rs17884159 CC 20 39 20 41 TC 25 49 25 50 TT 6 12 5 9 C 64 64 66 66 T 38 36 34 34 аллелей этого гена в развитие негативных последствий с применением различных моделей наследования. В нашем случае различие генотипов ММР9 Gln279Arg между выборками статистически значимо описывается как общей (х2 = 12,6; р = 0,002), так и аддитивной (х2 = 4,67; р = 0,031) моделями (табл. 4, 5). Таблица 4 SNP-различия гена ММР9 Gln279Arg между группами наблюдения и сравнения (общая модель наследования - тест х2, df = 1) Аллель Случай Контроль OR Значение 95 % ДИ Генотип A/A 0,300 0,549 0,35 0,16-0,80 Генотип A/G 0,660 0,314 4,25* 1,85-9,76 Генотип G/G 0,040 0,137 0,26 0,05-1,33 Примечания: * - х2 = 12,6; р = 0,002. Таблица 5 SNP-различия гена ММР9 Gln279Arg между группами наблюдения и сравнения (аддитивная модель наследования -тест Кохрана - Армитаджа для линейных трендов, х2 = 0, 1, 2], df 1) Генотип Случай Контроль OR Значение 95 % ДИ Генотип A/A 0,300 0,549 0,35 0,16-0,8 Генотип A/G 0,660 0,314 4,25* 1,85-9,76 Генотип G/G 0,040 0,137 0,26 0,05-1,33 Примечания:* х2 = 4,67; р = 0,031. В системе in vitro установлено, что стронций в концентрации 7 мг/дм3 ингибирует гибель клетки по пути апоптоза (рисунок). После внесения в опытные образцы стронция обнаружено статистически значимое (Ме 0,18; 95% ДИ 0,11-0,29; U = 37,50; Z = 4,80; р < 0,001) снижение в 2,2 раза количества Annexin V-FITC+РГ-клеток. Количество лимфоцитов, погибших по пути некроза после инкубации со Sr2+, увеличилось в 1,3 раза от исходного уровня (Ме 13,33; 95 % ДИ 10,87-17,05; U = 207,00; Z = -0,82; р = 0,411). Обсуждение результатов Очевидно, что в условиях гаптенной контаминации биосред стронцием происходит ингибирование апоп-тоза и активация клеточной гибели по пути некроза. 24 Ekologiya cheloveka (Human Ecology) 2021, 10, pp. 21-28 Original Articles 1.8 1.6 1,4 a 0 fe 1.2 1 e" 1.0 + <_> К Ц- 0.8 > с 'x ® 0.6 с < 0,4 0.2 0,0 1-■-1^- I- - I-.-1 Sr- Sr+ 28 і-.-.-.-.-1 26 ■ ■ 24 ■ ■ 22 ■ ■ о & 20 - - £ 18 - ■ CL U 16 - ■ ll > 14 - - E 'x X “ 12 ■ T ■ с < A 10 ■ T ■ 8 - - 6 ■ ■ 4 -'- '---'--'- Sr- Sr+ Результаты эксперимента в системе in vitro (Ме, размах без выброса); Sr- - проба без добавления стронция (контрольная); Sr+ - проба с добавлением стронция (опытная) По результатам ранее выполненных исследований доказано, что в среднем 57 % (максимум до 97 %) стронция из питьевой воды попадает в организм [12]. Факторами, изменяющими чувствительность организма к воздействию стронция, являются возраст, физическое состояние, генетический статус, питание, наличие вредных привычек (курение) [20]. Между тем не установлены гендерные особенности скорости поглощения стронция в желудочно-кишечном тракте. Дети, в отличие от взрослых, особенно в первые месяцы и годы жизни подвержены негативному влиянию стронция на организм. После рождения продолжаются рост и дифференциация костной ткани, формирование скелета, что диктует необходимость значительного поступления кальция в организм. Как результат повышенной потребности организма в кальции в период роста костей происходит большее поглощение, всасывание из желудочно-кишечного такта и удержание стронция в организме [12, 20]. Основным механизмом потенциальной иммунотоксичности стронция является его прямая конкуренция с кальцием (Са2+), имеющим в атоме на одну электронную оболочку меньше по сравнению со стронцием. Формируется конкуренция между SR+и Са2+ за связывания с различными кальцийсвязывающими белками, вторичными клеточными мессенджерами и чувствительными к кальцию рецепторам, сопряженными с G-белками, экспрессируемыми в клетках костной ткани, иммунной системы и других клетках организма [12]. Стронций способен замещать Са2+, а последнему принадлежит ключевая роль в регуляции важнейших внутриклеточных сигнальных каскадов. В регуляции кальциевого гомеостаза клеток, в том числе и лимфоцитов, участвуют митохондрии. Установлена способность стронция опосредованно модифицировать транскрипцию ряда генов, контролирующих апоптоз. Экспериментально продемонстрирована строн-цийиндуцированная активация канонического сигнального пути Wnt/ß-катенин инициирующего транскрипцию генов, регулирующих клеточный цикл [23]. Некоторые исследования показали Sr-опосредованную активацию неканонического Wnt-сигнального пути, отвечающего за организацию цитоскелета и кальциевый обмена [16]. Установлено, что стронций активирует сигнальный путь SDF-1a/ CXCR4 как в системе in vitro, так и в системе и in vivo [24]. CXCR4 реализует активацию Ras (протоонкогена) и ZAP-70 - молекулу, активирующую Т-лимфоциты. Экспрессия SDF-1 возникает при стрессовых ситуациях (гипоксия, механическая травма и др.), его роль заключается в ингибирование апоптоза и стимуляции пролиферации клеток. SDF-1 а активирует сигнальный путь PI3K/Akt [15], ключевой функцией которого является регуляция (торможение) апоптоза [19]. Между тем ингибирование сигнального каскада PI3K/Akt ограничивает активацию Т-лимфоцитов [22]. FGF/FGFR - система, запускаемая стронцием, активирует Akt-, ERK1,3-, р38-опосредованный сигналинг, обеспечивающий регуляцию апоптоза [8]. Антиапоптотический фактор Akt способен регулировать уровни Са2+ в митохондриях посредством уменьшения потока кальция из эндоплазматического ретикулума. Данный эффект возможен в результате ингибирования инотропного IP3R. По данному механизму Akt защищает клетку от апоптоза, опосредованного Са2+. Интересно, что Akt может локализоваться также в митохондриях, а внутримитохондриальная активная Akt обеспечивает эффективную защиту от апоптотической передачи сигналов [11]. Посредством Akt-зависимого фос-форилирования ряда белков изменяется уровень экспрессии р53 [21]. В опухолевых клетках Akt/ 25 Оригинальные статьи Экология человека 2021, № 10, с. 21-28 РКВ и PI3K стимулируют метаболизм глюкозы, в результате чего увеличивают выживаемость и рост патологических клеток. Активация Akt/РКВ повышает содержание поверхностных глюкозных транспортеров и координирует положение и экспрессию митохондриальных гексокиназ, отвечающих за фос-форилирование глюкозы [5]. PI3-киназный и МАР-киназный каскады являются ключевыми регуляторами деления многих клеток. Предполагают наличие негативной регуляции между р53-опосредованными путями и МАР-киназными путями [2]. Протеин р53 способен регулировать транскрипцию генов, белковые продукты которых изменяют механизм апоптоза: повышает транскрипцию респонсивных генов bax, р53, FAS, снижает транскрипцию - bcl-2. Показано, что протеинкиназные каскады в различных клеточных культурах способны ингибировать FAS-зависимый апоптоз на уровне активации каспазы-8 [2, 4]. В системе in vivo показано, что у крыс с моделированной интоксикацией стронцием (из расчета 2 г/л; ±200 мг/кг/день) наблюдается ингибирования апоптоза хондроцитов [10]. Показано, что генетические особенности, выраженность которых может быть достаточно значимой, характеризуются исключительно высокой чувствительностью к каким-либо химическим факторам, что повышает генетическую вариативность в популяции. Металлопротеиназы являются триггерами МАР-киназного пути, окислительного стресса, каспазазависимой гибели клетки. ММР гидролизуют FASL, цитокины, различные хемокины, в том числе SDF-1, способствуя активации или инактивации соответствующих субстратов. IL-2Ra также является неколлагеновым субстратом ММР9 [7]. Митохондриальная MMP9 изменяет гомеостаз Са2+ и увеличивает образование митохондриальных пор, что приводит к сократительной дисфункции в гипергомоцистеинемических кардиомиоцитах [17]. Данный эффект указывает на возможную роль MMP9 в нарушении активности Са2+-АТФ-азы саркоплазматического ретикулума, подтверждая важнейшую роль MMP9 в гомеостазе кальция [18]. Гену MTHFR принадлежит ключевая роль в процессе метилирования и синтеза ДНК, показана его принадлежность к процессу репарации ДНК и накоплению повреждений хромосом, вследствие чего данный ген потенциально способен повышать риск развития рака [1]. Полиморфизм гена MTHFR рассматривается как важный фактор, влияющий на основные клеточные и митохондриальные дисфункции. Фермент CYP1A1 локализован в легких, печени (менее 1 %), лимфоцитах, плаценте [6]. Ген цитохрома Р-450 CYP1A1 отвечает за метаболизм в первой фазе детоксикации. Риск развития патологии или генотоксических эффектов наибольший при высокой активности первой фазы и низкой активности второй фазы биотрансформации ксенобиотиков. Установлена ассоциация полиморфных генов фермента CYP1A1 с нарушением состояния здоровья: предрасположенность к злокачественным новооб разованиям (рак легких, полости рта, лейкозы и др.) [6]. CPOX представляет собой митохондриальный фермент, кодируемый геном CPOX, активность которого реализуется при наличии молекулярного кислорода. Гены ММР9 Gln279Arg, CYP1A1 Ile462Val, CPOXrs1131857, MTHFR rs1801131 модифицируют различные аспекты иммунного ответа: участвуют в модулировании апоптотических сигналов, определяют работу митохондрий, регулируют кальциевый обмен. Полиморфизм гена TP53 ингибирует апоптоз и способствует развитию в клетках дополнительных онкогенных событий. Очевидно, апоптоз инициируется множеством факторов и регулируется различными внутриклеточными сигнальными путями, пересекающимися между собой. Ответ клетки на воздействие Sr2+ будет зависеть от дозы вещества, времени воздействия, типа клетки, активационного статуса клетки, но наблюдаемый эффект всегда в той или иной степени будет касаться коррекции программы клеточной гибели. Заключение Таким образом, в условиях гаптенной контаминации биологических сред (кровь), обусловленной поступлением стабильного стронция с питьевой водой, происходит нарушение реализации программированной клеточной гибели. Установлено, что у детей, экспонированных стронцием, статистически значимо (р < 0,001) снижено в среднем в 2,5 раза содержание белка р53, CD95+-лимфоцитов, Annexin V-FITC+PP-лимфоцитов и повышено в среднем в 1,7 раза содержание CD25+-лимфоцитов и Annexin V-FITC+PI+-лимфоцитов, а также повышена частота гетерозиготного генотипа гена ММР9 Gln279Arg в 2,5 раза относительно результатов, полученных у неэкспонированных детей. Концентрация стронция в крови в диапазоне от 0,040 до 0,091 мг/ дм3 ассоциирована с ингибированием апоптоза и переключением на альтернативный путь клеточной гибели - некроз, что на фоне полиморфности кан-дидатных генов создает опасность формирования аутоиммунной патологии.

About the authors

O. V. Dolgikh

Federal Scientific Center for medical and preventive health risk management technologies of the Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance

Email: oleg@fcrisk.ru
Perm

D. G. Dianova

Federal Scientific Center for medical and preventive health risk management technologies of the Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance; Perm State Pharmaceutical Academy

Perm

A. V. Krivtsov

Federal Scientific Center for medical and preventive health risk management technologies of the Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance

Perm

References

Supplementary files