Reactive changes in the monocytic lineage of the bone marrow during the recovery period after parenchymal liver hemorrhage

Nikolay S. Felenko; Феленко Николай Сергеевич; Nikolay S. Felenko; Elena D. Kubasova; Кубасова Елена Дмитриевна; Elena D. Kubasova; Nikita A. Shutsky; Шутский Никита Алексеевич; Nikita A. Shutsky; Sergey L. Kashutin; Кашутин Сергей Леонидович; Sergey L. Kashutin; Denis V. Mizgirev; Мизгирёв Денис Владимирович; Denis V. Mizgirev; Roman V. Kubasov; Кубасов Роман Викторович; Roman V. Kubasov; Maria V. Katorina; Каторина Мария Владиславовна; Maria V. Katorina; Alexander V. Toropov; Торопов Александр Валерьевич; Alexander V. Toropov; Olga V. Dolgikh; Долгих Ольга Васильевна; Olga V. Dolgikh; Dmitry V. Shatov; Шатов Дмитрий Викторович; Dmitry V. Shatov; Natalia V. Sukhorukova; Сухорукова Наталия Владимировна; Natalia V. Sukhorukova; Andrey V. Safronenko; Сафроненко Андрей Владимирович; Andrey V. Safronenko; Dmitry V. Safonov; Сафонов Дмитрий Владимирович; Dmitry V. Safonov; Galina S. Groshilina; Грошилина Галина Сергеевна; Galina S. Groshilina; Elena A. Kutuzova; Кутузова Елена Александровна; Elena A. Kutuzova; Sergey N. Linchenko; Линченко Сергей Николаевич; Sergey N. Linchenko; Artem V. Sklyarov; Скляров Артём Вадимович; Artem V. Sklyarov; Tatiana V. Ostapenko; Остапенко Татьяна Вячеславовна; Tatiana V. Ostapenko; Svetlana A. Akopyants; Акопьянц Светлана Алексеевна; Svetlana A. Akopyants; Karina S. Karakhanyan; Караханян Карина Суреновна; Karina S. Karakhanyan; Sergey M. Groshilin; Грошилин Сергей Михайлович; Sergey M. Groshilin

doi:10.17816/humeco642350

Реактивные изменения моноцитарного звена костного мозга в восстановительном периоде после паренхиматозного кровотечения печени

Авторы: Феленко Н.С.¹, Кубасова Е.Д.¹, Шутский Н.А.¹, Кашутин С.Л.¹, Мизгирёв Д.В.¹, Кубасов Р.В.¹, Каторина М.В.¹, Торопов А.В.¹, Долгих О.В.¹, Шатов Д.В.², Сухорукова Н.В.², Сафроненко А.В.², Сафонов Д.В.³, Грошилина Г.С.⁴, Кутузова Е.А.⁴, Линченко С.Н.⁵, Скляров А.В.², Остапенко Т.В.², Акопьянц С.А.², Караханян К.С.², Грошилин С.М.²
Учреждения:
1. Северный государственный медицинский университет
2. Ростовский государственный медицинский университет
3. Городская клиническая больница скорой медицинской помощи
4. 1602 военный клинический госпиталь
5. Кубанский государственный медицинский университет
Выпуск: Том 31, № 8 (2024)
Страницы: 618-627
Раздел: ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Статья получена: 28.11.2024
Статья одобрена: 10.02.2025
Статья опубликована: 27.12.2024
URL: https://hum-ecol.ru/1728-0869/article/view/642350
DOI: https://doi.org/10.17816/humeco642350
EDN: https://elibrary.ru/KFVRYF
ID: 642350

Цитировать

Полный текст

Аннотация
Полный текст
Об авторах
Список литературы
Дополнительные файлы
Статистика

Аннотация

Обоснование. Процессы восстановления повреждённых тканей в организме представляют собой достаточно сложную систему последовательно протекающих изменений. Скорость заживления зависит от множества факторов, но ведущим из них считается состояние гуморального ответа. Функциональное состояние клеток моноцитарного звена во многом определяет процессы репарации. В этой связи представляет научный интерес и практическую значимость изучение перестроек регуляторных компонентов в ответ на повреждение ткани.

Цель. Изучение реактивных изменений, заключающихся в пролиферации, дифференцировке и рекрутинге клеток моноцитарного звена костного мозга в восстановительном периоде после паренхиматозного кровотечения печени.

Материалы и методы. Проведено экспериментальное исследование in vivo на беспородных крысах обоих полов, которым было смоделировано повреждение печени (паренхиматозное кровотечение). В опытной группе лечение сопровождалось включением в терапию ксеногенного биоматериала на основе коллагена из шкуры северного оленя как гемостатического средства. В костном мозге определяли миелограмму с учётом моноцитограммы. Дифференцировали следующие морфологические варианты: монобласты, промоноциты, собственно моноциты и полиморфно-ядерные моноциты. В связи с ненормальным распределением данных описание переменных проводили с помощью медианы (Мe) и квартилей (Q25; Q75). Вероятность различий показателей между группами оценивали с помощью критерия Колмогорова–Смирнова (Z). Критический уровень статистической значимости принимали при р <0,05. Статистическую обработку результатов проводили с помощью SPSS 13.0 для Windows.

Результаты. На 3-и сутки после моделирования паренхиматозного кровотечения печени реактивные изменения в моноцитарном звене заключались в увеличении уровня промоноцитов с 0,6 до 1,9% (р <0,001), собственно моноцитов — с 1,5 до 4,6% (р=0,010) при неизменённом уровне монобластов (0,8%; p=0.850). На 7-е сутки эксперимента произошло снижение числа промоноцитов и монобластов до 0,8% (р=0,006) и 0,6% (р=0,850) соответственно. На 14-е сутки эксперимента статистически значимых изменений со стороны изучаемых параметров не регистрировали. На 21-е сутки выявлено снижение количества собственно моноцитов до 4,6% (р=0,120), полиморфно-ядерных моноцитов — до 0,2% (р=0,990), промоноцитов — до 0,8% (р=0,290) при неизменном уровне монобластов.

Заключение. Реактивные изменения клеток моноцитарного звена костного мозга после паренхиматозного кровотечения печени заключаются в активации процессов пролиферации и дифференцировки на 3-и сутки. На 7-е сутки увеличивается интенсивность рекрутинга моноцитов из костного мозга в периферическую кровь. Через 3 недели уровни монобластов, промоноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов возвращаются к контрольным значениям, тогда как содержание собственно моноцитов сохраняется на высоком уровне.

Ключевые слова

паренхиматозное кровотечение, костный мозг, моноцитарные клетки

Полный текст

ОБОСНОВАНИЕ

Повреждение печени обычно сопровождается диффузным и обильным кровотечением. Тяжесть патологии обусловлена отсутствием клапанов в венах, возможностью сосудов печени спадаться, низкой сократительной способностью органа, фибринолитической активностью истекающей жёлчи, что приводит к последующему нарушению функций печени. От скорости наступления гемостаза, процессов регенерации печени и восстановления её функций после повреждения зависит сохранение жизни пациента и качество его жизни [1–3].

Моноциты/макрофаги принимают участие в развитии регенеративного процесса в зоне повреждения путём синтеза и секреции цитокинов и энзимов, кооперации с другими иммунокомпетентными клетками и воздействия на фибробласты. От регуляции пролиферации, дифференцировки и рекрутирования клеток моноцитарного дифферона из костного мозга зависят процессы репарации [4–6].

Исходя из того, что система мононуклеарных фагоцитов представлена монобластами, промоноцитами, собственно моноцитами и макрофагами [7], ключевым моментом является изучение соотношения этих субпопуляций в динамике регенеративного процесса в костном мозге в ходе восстановительного периода после паренхиматозного кровотечения печени.

Согласно современным представлениям, промоноциты, мигрируя из костного мозга в кровь, имеют способность к пролиферации, а после их дифференцировки в моноциты такая способность теряется, поскольку моноциты становятся высокодифференцированными клетками, обеспечивая неспецифическую защиту организма за счёт своей фагоцитарной активности и секреции монокинов. Из моноцитов крови постоянно созревают макрофаги, которые, покидая кровяное русло, мигрируют в различные ткани организма, где выполняют свои эффекторные и регуляторные функции [7–9].

Несмотря на многофункциональность клеток моноцитарного звена, сведения относительно их пролиферации, дифференцировки и рекрутинга в ходе регенеративного процесса после паренхиматозного кровотечения из печени в литературе отсутствуют.

Цель исследования

Изучение реактивных изменений, заключающихся в пролиферации, дифференцировке и рекрутинге клеток моноцитарного звена костного мозга в восстановительном периоде после паренхиматозного кровотечения печени.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Выполнено экспериментальное исследование in vivo на 71 беспородной крысе обоих полов с массой 180–220 г. Исследуемые животные были разделены на две группы: опытная (n=52), в которой гемостаз достигался путём нанесения ксеногенного биоматериала на основе коллагена, полученного из шкуры северного оленя [10], и контрольная (n=19). В контрольную (интактную) группу были включены лабораторные крысы, которые содержались на идентичном пищевом и питьевом режиме. Моделирование паренхиматозного кровотечения у животных контрольной группы не проводили.

Все процедуры, выполненные в исследованиях с участием животных, соответствовали этическим стандартам, утверждённым правовыми актами Российской Федерации, принципам Базельской декларации и рекомендациям этического комитета ФГБОУ ВО СГМУ (Архангельск) Минздрава России, протокол № 04/05-23 от 26.05.2023.

Методика моделирования паренхиматозного кровотечения печени

Лабораторное животное располагали на спине с фиксацией конечностей. В ходе ингаляционной анестезии хлороформом по закрытому контуру лабораторных крыс брили в области живота, которую 3-кратно обрабатывали 0,5% спиртовым раствором хлоргексидина биглюконата, и отграничивали операционное поле стерильным одноразовым бельём.

Далее производили верхнесреднюю срединную лапаротомию путём послойного рассечения мягких тканей передней брюшной стенки от мечевидного отростка до средней 1/3 живота, соблюдая тщательный гемостаз краёв раны.

Под выведенную левую долю печени подкладывали стерильную сухую марлевую салфетку и наносили скальпированную рану размерами 10×10 мм и глубиной до 5 мм (рис. 1).

Рис. 1. Выведение левой доли печени (a) и нанесение скальпированной раны (b).

Fig. 1. Removal of the left lobe of the liver (a) and its application of a scalped wound (b).

На возникшее капиллярное паренхиматозное кровотечение из печени сразу производили аппликацию ксеногенного биоматериала на основе коллагена (рис. 2), не допуская обильных кровопотерь [11].

Рис. 2. Ксеногенный биоматериал на основе коллагена, полученного из шкуры северного оленя (a), и аппликация его на скальпированную рану печени (b).

Fig. 2. Сollagen-based xenogenic biomaterial from reindeer dermis (a) and its application to a scalped liver wound (b).

После достижения полного гемостаза послойно ушивали лапаротомную рану узловыми капроновыми швами. Контроль состояния животных в ходе эксперимента проводили ежедневно. Вывод лабораторных крыс из эксперимента осуществляли по 13 особей передозировкой средства для наркоза на 3, 7, 14 и 21-е сутки.

Методика морфологической дифференцировки моноцитов в костном мозге

Забор костного мозга осуществляли из проксимального отдела бедренной кости при выведении животного из эксперимента [12]. Мазки костного мозга после фиксации окрашивали по Романовскому–Гимзе и подсчитывали миелограмму соответственно с учётом моноцитограммы, дифференцируя их на морфологические варианты: монобласты, промоноциты, собственно моноциты и полиморфноядерные моноциты (рис. 3).

Рис. 3. Миелограмма костного мозга крыс с дифференцировкой моноцитарного звена на монобласты (a), промоноциты (b), собственно моноциты (с), полиморфно-ядерные моноциты (d). Окрашивание по Романовскому–Гимзе; ×400.

Fig. 3. Myelogram of rat bone marrow with differentiation of the monocyte unit into monoblasts (a), promonocytes (b), monocytes proper (c), polymorphonuclear monocytes (d). Romanovsky–Giemse coloring; ×400.

Классическая идентификация следующая: промоноциты — клетки с округлым ядром, собственно моноциты — с бобовидным ядром, полиморфно-ядерные моноциты — с многолопастным ядром, часто причудливой формы.

В связи с ненормальным распределением данных описание переменных проводили с помощью медианы (Мe) и квартилей (Q25; Q75). Вероятность различий показателей между группами оценивали по критерию Колмогорова–Смирнова (Z). Критический уровень статистической значимости принимали при р <0,05. Статистическую обработку результатов проводили с помощью SPSS 13.0 для Windows.

РЕЗУЛЬТАТЫ

В соответствии с полученными результатами (табл. 1) после паренхиматозного кровотечения печени реактивные изменения в усреднённых данных связаны с увеличением содержания собственно моноцитов с 1,5 до 5,8% (р <0,001). Снижение уровня монобластов костного мозга не было статистически значимым (с 0,8 до 0,6%; р=0,270). Наблюдалось незначительное увеличение промоноцитов (с 0,6 до 1,0%; р=0,080). Значения содержания полиморфно-ядерных моноцитов в опытной и контрольной группах не имели существенных различий (по 0,4%; p=0,190).

Таблица 1. Содержание моноцитов костного мозга после паренхиматозного кровотечения печени в зависимости от их морфологии, Ме, % (Q25; Q75)

Table 1. The content of bone marrow monocytes after liver parenchymal bleeding, depending on their morphology, Ме, % (Q25; Q75)

Показатель

Indicator

Контрольная группа (к.)

The control group (к.)

(n=19)

Опытная группа

An experienced group

Уровень статистической значимости между сравниваемыми группами

The level of statistical significance between the compared groups

Среднее значение*

The average value*

(n=52)

3-и сутки

3^rd day

(n=13)

7-е сутки

7^th day

(n=13)

14-е сутки

14^th day

(n=13)

21-е сутки

21^st day

(n=13)

Монобласты

Monoblasts

0,8

(0,7; 1,2)

0,6

(0,4; 0,8)

0,8

(0,5; 1,3)

0,6

(0,2; 1,0)

0,4

(0,2; 0,5)

0,4

(0,3; 0,8)

к.–сред. знач.: Z=0,99; р=0,270

к.–3-и сут: Z=0,43; р=0,990

3-и сут–7-е сут: Z=0,61; р=0,850

7-е сут–14-е сут: Z=1,02; р=0,240

14-е сут–21-е сут: Z=0,53; р=0,930

к.–21-е сут: Z=0,97; р=0,290

Промоноциты

Promonocytes

0,6

(0,4; 1,2)

1,0

(0,8; 1,8)

1,9

(1,4; 2,5)

0,8

(0,6; 1,4)

1,0

(0,7; 1,7)

0,8

(0,5; 1,3)

к.–сред. знач.: Z=1,26; р=0,080

к.–3-и сут: Z=2,27; р <0,001

3-и сут–7-е сут: Z=1,71; р=0,006

7-е сут–14-е сут: Z=0,78; р=0,570

14-е сут–21-е сут: Z=0,98; р=0,290

к.–21-е сут: Z=0,65; р=0,790

Собственно моноциты

Actually monocytes

1,5

(0,8; 2,7)

5,8

(4,4; 8,0)

4,6

(1,8; 9,0)

6,6

(5,5; 8,5)

5,8

(5,2; 9,4)

4,6

(3,4; 6,9)

к.–сред. знач.: Z=2,94; р <0,001

к.–3-и сут: Z=1,54; р=0,010

3-и сут–7-е сут: Z=1,07; р=0,200

7-е сут–14-е сут: Z=0,58; р=0,870

14-е сут–21-е сут: Z=1,17; р=0,120

к.–21-е сут: Z=2,13; р <0,001

Полиморфно-ядерные моноциты

Polymorphonuclear monocytes

0,4

(0,0; 1,1)

0,4

(0,2; 0,6)

0,4

(0,2; 1,0)

0,5

(0,2; 1,0)

0,3

(0,2; 0,4)

0,2

(0,1; 0,3)

к.–сред. знач.: Z=1,08; р=0,190

к.–3-и сут: Z=0,69; р=0,720

3-и сут–7-е сут: Z=0,26; р=0,990

7-е сут–14-е сут: Z=0,81; р=0,510

14-е сут–21-е сут: Z=0,35; р=0,990

к.–21-е сут: Z=0,84; р=0,470

* Усреднённые значения опытной группы крыс.

* Average values of the experimental group of rats.

С учётом того, что усреднённые данные по содержанию клеток моноцитарного звена не показывают детали реактивных изменений, представляло интерес изучение моноцитограммы красного костного мозга в зависимости от суток после паренхиматозного кровотечения. Так, на 3-и сутки эксперимента регистрировали статистически значимое увеличение содержания промоноцитов (с 0,6 до 1,9%; р <0,001) и собственно моноцитов (с 1,5 до 4,6%; р=0,010). Однако различия в содержании монобластов и полиморфно-ядерных моноцитов между опытной и контрольной группами не выявлены: 0,8% (p=0,990) и 0,4% (p=0,720) соответственно.

На 7-е сутки после моделирования паренхиматозного кровотечения снижение содержания промоноцитов с 1,9 до 0,8% (р <0,001) происходило на фоне незначительного увеличения уровня собственно моноцитов с 4,6 до 6,6% (р=0,200). Изменения в содержании монобластов и полиморфно-ядерных моноцитов были незначительными.

На 14-е сутки эксперимента статистически значимых изменений со стороны изучаемых параметров не регистрировали. Наблюдали лишь небольшое снижение содержания монобластов, собственно моноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов. Слабое увеличение уровня демонстрировали только промоноциты (до 1,0%; р=0,570).

На 21-е сутки отмечали продолжение снижения количества собственно моноцитов (до 4,6%; р=0,120) и полиморфно-ядерных моноцитов (до 0,2%; р=0,990). Также незначительно снизился уровень промоноцитов (до 0,8%; р=0,290). Содержание монобластов не изменилось. В сравнении с контрольной группой в восстановительном периоде после паренхиматозного кровотечения к 21-м суткам у животных опытной группы доли монобластов, промоноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов были сопоставимы. Доля собственно моноцитов в опытной группе (4,6%) была в 3 раза выше (р <0,001) по сравнению с контрольной группой (1,5%).

ОБСУЖДЕНИЕ

Повреждения печени и других паренхиматозных органов с обильными кровотечениями как открытого, так и закрытого типов являются одними из самых распространённых травм, угрожающих жизни пациентов. Исследования в области патогенеза таких случаев преимущественно связаны с определением объёма кровопотери, степени тяжести анемии и гемодинамических свойств [13, 14]. Небольшое внимание уделяют изменениям гемограммы и биохимическим показателям периферической крови [15]. Однако источник гемопоэтических клеток, а именно красный костный мозг, практически не исследуют, по нашему мнению, в связи с его труднодоступностью и сложностью идентификации клеток.

С другой стороны, большинство работ направлены на изучение и разработку тактики ведения пациентов с поражениями печени различной природы: токсическими, биологическими и вирусными [1, 2]. Макрофаги и клетки моноцитарного звена исследуются в меньшей степени. Сотрудники Института иммунологии и физиологии УрО РАН установили повышение содержания макрофагов в повреждённом участке печени при частичной гепактоэктомии и сделали предположение, что система фагоцитирующих мононуклеаров принимает большое значение в регуляции реакций стволовых клеток костно-мозгового происхождения [4, 16].

Способность клеток моноцитарного звена инициировать и поддерживать развитие воспалительной реакции, высвобождая провоспалительные цитокины TNF-α, IL-6, IL-1β, активировать эндотелиальные или звёздчатые клетки печени, влиять на фиброзирование паренхимы подтверждает их роль в участии воспалительного и регенераторного процессов при патологиях печени [17–19]. Несомненно, сведения относительно пролиферации, дифференцировки и рекрутинга моноцитарного дифферона в костном мозге в динамике регенеративного процесса при паренхиматозном повреждении печени представляют не только теоретический, но и практический интерес, связанный с ускорением регенеративных процессов, происходящих в печени, восстановлением её функций, что напрямую связано с качеством жизни пациента.

В настоящем исследовании установлено, что на 3-и сутки после паренхиматозного кровотечения печени регистрируется увеличение числа промоноцитов и собственно моноцитов костного мозга при неизменных уровнях полиморфно-ядерных моноцитов и монобластов. Увеличение доли промоноцитов при неизменном содержании монобластов позволяет предполагать, что на 3-и сутки после паренхиматозного кровотечения происходит активация пролиферации промоноцитов наряду с монобластами, что подтверждает способность промоноцитов к пролиферации [18]. В то же время статистически значимое увеличение числа собственно моноцитов может свидетельствовать об активизации процессов дифференцировки из промоноцитов в более зрелые формы.

К 7-м суткам эксперимента регистрируемое снижение числа промоноцитов на фоне незначительного увеличения содержания собственно моноцитов может указывать на увеличение рекрутинга, в частности промоноцитов, из костного мозга в периферическую кровь, а затем в повреждённый участок. Обращает на себя внимание тот факт, что на 7-е сутки после паренхиматозного кровотечения происходит снижение содержания монобластов, которое на 3-и сутки эксперимента отсутствовало. Другими словами, на 7-е сутки пролиферативная активность из монобластов в промоноциты происходит более интенсивно, чем формирование монобластов.

На 14-е и 21-е сутки после паренхиматозного кровотечения значимых изменений, которые были на 3-и сутки, не наблюдали. Продолжалось постепенное снижение количества промоноцитов, собственно моноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов без изменения содержания монобластов, что может свидетельствовать о превалировании процессов рекрутинга промоноцитов, собственно моноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов в этот период.

В сравнении с контрольной группой в восстановительном периоде после паренхиматозного кровотечения к 21-м суткам уровни монобластов, промоноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов были сопоставимы. Различие заключалось в повышенном содержании собственно моноцитов у крыс, что может указывать на увеличение в костном мозге пула моноцитов, способных выполнять все присущие для них функции. Данное наблюдение согласуется с современными представлениями о механизме репаративной регенерации печени после паренхиматозного кровотечения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Реактивные изменения клеток моноцитарного звена костного мозга после паренхиматозного кровотечения печени заключаются в активации процессов пролиферации и дифференцировки на 3-и сутки. На 7-е сутки увеличивается интенсивность рекрутинга моноцитов из костного мозга в периферическую кровь. Через 3 нед после паренхиматозного кровотечения уровни монобластов, промоноцитов и полиморфно-ядерных моноцитов возвращаются к контрольным значениям, тогда как содержание собственно моноцитов сохраняется на высоком уровне.

Таким образом, выявленные механизмы пролиферации, дифференцировки и рекрутинга клеток моноцитарного дифферона после паренхиматозного кровотечения печени могут представлять основу для разработки корректирующих мероприятий, направленных на ускорение регенерации печени при её паренхиматозных повреждениях.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Вклад авторов. Н.С. Феленко, Е.Д. Кубасова, Н.А. Шутский, С.Л. Кашутин — разработка идеи исследования, анализ данных, утверждение текста статьи; Д.В. Мизгирев, Р.В. Кубасов — подготовка и написание текста статьи, М.В. Каторина, А.В. Торопов, О.В. Долгих – сбор материалов для исследования, Д.В. Шатов, Н.В. Сухорукова, А.В. Сафроненко, Д.В. Сафонов, Г.С. Грошилина, Е.А. Кутузова, С.Н. Линченко, А.В. Скляров, Т.В. Остапенко, С.А. Акопьянц, К.С. Караханян, С.М. Грошилин — научный анализ, интерпретация результатов, написание статьи. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).

Этическая экспертиза. Все процедуры, выполненные в исследованиях с участием животных, соответствовали этическим стандартам, утверждённым правовыми актами Российской Федерации, принципам Базельской декларации и рекомендациям этического комитета ФГБОУ ВО СГМУ (Архангельск) Минздрава России, протокол № 04/05-23 от 26.05.2023 .

Источник финансирования. Научное исследование проведено в рамках государственного задания № 124022800143-5.

Раскрытие интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

ADDITIONAL INFORMATION

Author contributions. N.S. Felenko, E.D. Kubasova, N.A. Shutsky, S.L. Kashutin — development of the research idea, data analysis, approval of the text of the article; D.V. Mizgirev, R.V. Kubasov — preparation and writing of the text of the article, M.V. Katorina, A.V. Toropov, O.V. Dolgikh — collection of materials for research, D.V. Shatov, N.V. Sukhorukova, A.V. Safronenko, D.V. Safonov, G.S. Groshilina, E.A. Kutuzova, S.N. Linchenko, A.V. Sklyarov, T.V. Ostapenko, S.A. Akopyants, K.S. Karakhanyan, S.M. — scientific analysis, interpretation of results, writing an article. All authors confirm that their authorship meets the international ICMJE criteria (all authors have made a significant contribution to the development of the concept, research and preparation of the article, read and approved the final version before publication).

Ethics approval. All procedures performed in animal studies complied with ethical standards approved by the legal acts of the Russian Federation, the principles of the Basel Declaration and the recommendations of the Ethics Committee of the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Medical Education (Arkhangelsk) Ministry of Health of the Russian Federation, Protocol No. 04/05-23 dated 05/26/2023.

Funding source. The scientific research was conducted within the framework of the state assignment No. 124022800143-5.